Риф абс отрицательный что означает. Риф анализ на сифилис

Своевременное выявление сифилиса (с помощью специальных анализов) позволяет врачам вовремя начать лечение и предотвратить развитие опасных осложнений этой болезни.

Проведение анализов на сифилис во время беременности помогает предотвратить рождение детей с врожденным сифилисом. Подробно об анализах на сифилис во время беременности рассказано в статье .

Почему мне назначили анализ на сифилис?

В подавляющем большинстве случаев у врачей нет возможности получить точные данные о сексуальной жизни пациентов (некоторые люди скрывают детали своей половой жизни или недооценивают риск заражения заболеваниями передающимися половым путем). В связи с этим, для того чтобы защитить людей от возможных последствий их собственной невнимательности или недостатка медицинских знаний, в некоторых случаях врачи назначают так называемые скрининговые анализы на сифилис (то есть анализы, которые сдают большие количества людей).

Врач может назначить вам анализы на сифилис, даже если у вас нет симптомов этой болезни, и вы уверены, что не могли им заразиться.

Необходимость проведения этих анализов связана с тем, что сифилис иногда передается бытовым путем (не через сексуальный контакт) и протекает в скрытой форме (то есть без симптомов).

Как правило, скрининговое обследование назначается в следующих ситуациях:

1. При устройстве на работу (работникам здравоохранения, общественного питания, военнослужащим и пр.)
2. При становлении на учет по поводу беременности.
3. Во время поступления в больницу, при подготовке к операциям.
4. Донорам крови.
5. Лицам, заключенным в местах лишения свободы.

Врач также может назначить анализы на сифилис:

1. При обнаружении симптомов заболевания (обычно, это сыпь в области половых органов).
2. При получении положительных результатов скрининговых анализов на сифилис.
3. В случае если у вас был половой контакт с человеком, у которого был выявлен сифилис.
4. Новорожденным детям, матери которых больны сифилисом.

Кроме того, анализы на сифилис периодически проводятся во время лечения (для того, чтобы убедиться в том, что лечение эффективно) и даже после окончания курса лечения, для контроля излеченности.

Какие анализы используются в диагностике сифилиса?

Диагностикой и лечением сифилиса занимается врач дерматовенеролог. В диагностике заболевания могут быть использованы следующие анализы:

Осмотр кожи, наружных и внутренних половых органов производится с целью выявления основных симптомов сифилиса: твердый шанкр, увеличение лимфатических узлов, высыпания на коже и пр. (см. )

Для того чтобы обнаружить бледную трепонему , врачи обследуют под микроскопом мазки (или соскобы), полученные из язв, лимфатических узлов, околоплодных вод у беременных и пр. Кровь под микроскопом не обследуют.

Важно: Если в ваших анализах под микроскопом была обнаружена бледная трепонема, это означает, что вы точно больны сифилисом. Но если анализы показали, что возбудитель сифилиса не обнаружен, нельзя быть полностью уверенным в том, что сифилиса нет. Для того чтобы убедиться, что вы не больны, нужно сдать дополнительные анализы, описанные ниже.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) – это сложный и дорогостоящий метод диагностики сифилиса, который позволяет обнаружить ДНК бледной трепонемы в крови или других исследуемых материалах (околоплодные воды, спинномозговая жидкость). Если анализ ПЦР дал отрицательный результат, то, скорее всего, вы не больны сифилисом. Однако при получении положительного результата (то есть, если ПЦР обнаружил ДНК бледной трепонемы в крови), нет 100% гарантии, что вы больны. Это связано с тем, что ПЦР иногда дает ложноположительные результаты (дает положительный результат при отсутствии заболевания). Поэтому если ПЦР дал положительный результат, рекомендуется дополнительно пройти другие методы обследования на сифилис (например, реакцию иммунофлюоресценции (РИФ) и реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА)).

Что такое серологический анализ на сифилис?

Серологический анализ – это обнаружение в крови особых белков (антител), которые вырабатываются в организме человека в ответ на инфекцию. В отличие от предыдущих методов диагностики, серологические анализы обнаруживают не саму бледную трепонему, а лишь ее «следы» в организме.

Если в вашей крови обнаружены антитела к бледной трепонеме, это говорит о том, что вы либо заражены сифилисом в данный момент, либо переболели им ранее.

Какие анализы указывают на то, что человек болен сифилисом?

Серологические анализы на сифилис делятся на 2 большие группы: неспецифические и специфические тесты. Основное различие этих анализов заключается в том, что неспецифические тесты показывают положительный результат только если человек болен сифилисом в данный момент и становятся отрицательными после излечения, а специфические тесты остаются положительными даже после излечения заболевания.

Говоря другими словами, отрицательный результат неспецифического теста является некоторой гарантией того, что вы здоровы.

Какие анализы на сифилис являются неспецифическими (нетрепонемными)?

К неспецифическим анализам относят микрореакцию преципитации (МР) и реакцию Вассермана (РВ, RW). Эти тесты используются для скрининга на сифилис. После излечения сифилиса эти анализы становятся отрицательными у 90% людей.

Как работают эти тесты: в результате жизнедеятельности бледной трепонемы (при сифилисе) в организме погибают клетки. В ответ на разрушение клеток иммунная система вырабатывает особые белки (антитела, или иммуноглобулины). Неспецифические тесты направлены на выявление этих антител, а также подсчет их концентрации (определение титра антител).

Микрореакция преципитации (МР) и ее аналоги в некоторых странах: тест быстрых реагинов (RPR, Rapid Plasma Reagins) и тест VDRL (Venereal Diseases Research Laboratory) — это нетрепонемные тесты, которые назначаются при скрининге на сифилис.

Что обследуют:

как правило, через 4-5 недель после заражения.

если анализ показал положительный результат, то есть вероятность, что вы больны сифилисом. Так как этот анализ может ошибочно давать положительные результаты, рекомендуется пройти дополнительное обследование с помощью специфических тестов, описанных ниже. Отрицательный результат указывает на отсутствие сифилиса, либо раннюю стадию заболевания (до появления антител в крови).

если в крови обнаружены антитела в титре от 1:2 до 1:320 и выше, это означает, что вы заражены сифилисом. При позднем сифилисе титр антител может быть низким (что оценивается как сомнительный результат).

ложноположительные результаты МР встречаются примерно в 2-5% случаев, вот их возможные причины:

1. Системные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, ревматоидный артрит , дерматомиозит, васкулиты и пр.)
2. Инфекционные заболевания: вирусные гепатиты , инфекционный мононуклеоз , туберкулез , некоторые кишечные инфекции и пр.
3. Воспалительные заболевания сердца (эндокардит , миокардит).
4. Сахарный диабет .
5. Беременность.
6. Недавно проведенная вакцинация (прививание).
7. Употребление алкоголя, наркотиков и др.
8. Перенесенный ранее и излеченный сифилис (примерно у 10% людей, прошедших курс лечения, анализ МР может оставаться положительным всю жизнь).

Какие могут быть причины ложноотрицательных результатов: анализ может ошибочно показать отрицательный результат, если в крови содержится много антител, если анализ взят на ранней стадии заболевания до появления антител, либо при позднем сифилисе, когда в крови остается мало антител.

Реакция Вассермана (РВ, RW) — это нетрепонемный тест, который используется для скрининга на сифилис в странах СНГ.

Что обследуют: кровь (из пальца или из вены), спинномозговую жидкость.

Через какое время после заражения анализ становится положительным: как правило, через 6-8 недель после заражения.

Как оценивать результаты анализа: «-» — отрицательная реакция, «+» или «++» это слабоположительная реакция, «+++» это положительная реакция, «++++» это резко положительная реакция. Если реакция Вассермана показала хотя бы один плюс, то вам необходимо сдать дополнительные анализы на сифилис. Отрицательная реакция не является гарантией того, что вы здоровы.

Как оценивать полученный титр антител: титр антител от 1:2 до 1:800 говорит о наличии сифилиса.

Какие могут быть причины ложноположительных результатов: реакция Вассермана может ошибочно дать положительный результат по тем же причинам, что и микрореакция преципитации (МР), а также, если незадолго до сдачи крови на анализ вы пили алкоголь или употребляли жирную пищу.

В связи с большим количеством ошибочных результатов Реакция Вассермана (РВ, RW) используется все реже и заменяется другими, более достоверными методами диагностики.

Неспецифические тесты (микрореакция преципитации (МР) и реакция Вассермана (РВ, RW)) являются хорошими методами диагностики сифилиса. Отрицательный результат обследования с большой вероятностью указывает на то, что вы здоровы. Но при получении положительных результатов этих анализов необходимо дополнительное обследование с помощью специфических (трепонемных) тестов.

Какие анализы на сифилис являются специфическими (трепонемными)?

К трепонемным тестам относят следующие анализы: реакция иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноблотинг, реакция пассивной агглютинации (РПГА), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), иммуноферментный анализ (ИФА).

Специфические тесты назначают людям, у которых выявлены положительные результаты микрореакции преципитации (МР) или реакции Вассермана (РВ). Специфические тесты остаются положительными еще долгое время после излечения сифилиса.

Как работают эти тесты: при попадании в организм возбудителей сифилиса иммунная система вырабатывает антитела, направленные на борьбу с бледной трепонемой. Эти антитела появляются в крови не сразу после заражения, а лишь спустя несколько недель. Примерно в конце второй недели после заражения в крови появляются антитела класса IgM. Антитела этого класса указывают на недавнее заражение сифилисом, однако в отсутствие лечения они сохраняются в крови в течение нескольких месяцев и даже лет (при этом их количество постепенно снижается). Через 4-5 недель после заражения сифилисом в крови начинают определяться антитела другого класса – IgG. Антитела этого типа сохраняются в крови в течение многих лет (иногда в течение всей жизни). Трепонемные тесты позволяют выявить наличие в крови антител (IgM и IgG), направленных на борьбу с бледной трепонемой.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) или Fluorescent Treponemal Antibody (FTA, и его разновидность FTA-ABS) — это трепонемный тест, который применяется для подтверждения диагноза сифилиса на самых ранних стадиях (даже до появления первых симптомов).

Что обследуют: кровь из вены или из пальца.

Через какое время после заражения анализ становится положительным : как правило, через 6-9 недель.

Как оценивать результаты анализа: Результаты анализа выдаются в виде минуса или плюсов (от одного до четырех). Если в анализе стоит минус, значит антитела не выявлены, и вы здоровы. Наличие одного плюса и более говорит о наличии сифилиса.

Какие могут быть причины ложноположительных результатов: ложноположительные результаты встречаются редко, однако ошибки возможны у людей с заболеваниями соединительной ткани (системная красная волчанка, дерматомиозит и пр.), у беременных и пр.

Реакция пассивной агглютинации (РПГА) , или Treponema pallidum hemagglutionation assay (TPHA) – это специфический тест, который применяется для подтверждения диагноза сифилиса практически на любой его стадии.

Что обследуют : кровь из вены или из пальца.

Через какое время после заражения анализ становится положительным: как правило, уже через 4 недели.

Как оценивать результаты анализа: положительный результат РПГА указывает на то, что вы больны сифилисом, либо здоровы, но перенесли эту болезнь в прошлом.

Как оценивать полученный титр антител: в зависимости от титра антител можно ориентировочно предположить давность заражения сифилисом. Вскоре после первого попадания трепонемы в организм титр антител, как правило, менее 1:320. Чем выше титр антител, тем больше времени прошло от момента заражения.

Иммуноферментный анализ (ИФА) , или Enzyme ImmunoAssay (EIA) , или ELISA (Еnzyme Linked ImmunoSorbent Assay) – это трепонемный тест, который применяется для подтверждения диагноза и определения стадии сифилиса.

Что обследуют: кровь из вены или из пальца.

Через какое время после заражения анализ становится положительным: уже через 3 недели после инфицирования.

Как оценивать результаты анализа: положительный результат ИФА указывает на то, что вы больны сифилисом, либо перенесли это заболевание ранее. Этот анализ может оставаться положительным и после излечения.

Определение давности заражения сифилисом с помощью ИФА: в зависимости от того, какие классы антител (IgA, IgM, IgG) обнаружены в крови, можно предположить давность заражения.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) – это высокочувствительный трепонемный тест, который применяется только в случаях сомнительных результатов других серологических анализов, при подозрении на ложноположительные результаты (у беременных, людей с заболеваниями соединительной ткани и пр.) РИБТ становится положительным только через 12 недель после заражения.

Иммуноблотинг (Western Blot) – высокочувствительный трепонемный тест, который применяется в диагностике врожденного сифилиса у новорожденных. Этот анализ применяется, когда остальные тесты дают сомнительный результат.

Что означают результаты серологических анализов на сифилис?

Диагноз сифилиса никогда не ставят по результатам одного анализа, так как всегда есть вероятность того, что результат был ошибочным. Для того чтобы получить точный диагноз, врачи оценивают результаты сразу нескольких тестов. Обычно, это один неспецифический тест и два специфических.

Наиболее часто в диагностике сифилиса используются 3 серологических анализа: микрореакция преципитации (МР), реакция иммунофлюоресценции (РИФ) и реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Перечисленные анализы часто дают противоположные результаты, поэтому мы разберем, что означают различные комбинации результатов:

Диагностика сифилиса: ответы на часто задаваемые вопросы

1. У меня никогда не было симптомов сифилиса, однако анализы показали положительные результаты. Что делать?

Прежде всего, вам необходимо выяснить у доктора, какие именно анализы показали положительный результат на сифилис. Если это один из скрининговых тестов (микрореакция преципитации (МР) или реакция Вассермана (РВ, RW)), то возможно, что результаты ложноположительные. В этом случае рекомендуется пройти трепонемные тесты на сифилис (РИФ, ИФА, РПГА). Если и они дадут положительный результат – то, вероятно, у вас скрытый сифилис, который протекает бессимптомно. Вам будет предложено пройти стандартное лечение скрытого сифилиса. (см. Лечение Сифилиса)

Если же трепонемные тесты дадут отрицательный результат, значит скрининговые тесты были ошибочны. В этом случае рекомендуется обратиться к врачу, который поможет выяснить причину ложноположительных результатов.

Важно понимать, что диагноз сифилиса не ставится по положительному результату одного анализа. Для уточнения диагноза необходимо полное обследование, план которого сообщит ваш лечащий врач.

2. Могу ли я заразить своего партнера, если у меня положительные результаты анализа на сифилис?

Если анализы показали, что у вас сифилис, вы можете заразить вашего полового партнера. Считается, что при однократном незащищенном половом контакте с человеком, больным сифилисом, риск заражения составляет около 30%. Однако при регулярной половой жизни этот риск несколько выше.

Поэтому вам необходимо сообщить своему половому партнеру о том, что он может быть заражен сифилисом и что ему нужно сдать анализы.

Важно понимать, что сифилис может длительное время протекать в скрытой форме, и если вы не сообщите своему партнеру о риске заражения, то он может узнать о наличии этого заболевания при развитии осложнений, когда будет уже слишком поздно.

3. Почему у меня результаты анализа на сифилис положительны, а у моего партнера (партнерши) отрицательны?

Существует несколько возможных причин:

1. Ваш партнер не заразился сифилисом. Риск передачи сифилиса во время однократного незащищенного полового контакта составляет около 30%. При регулярной незащищенной половой жизни этот риск составляет 75-80%. Таким образом, некоторые люди могут быть невосприимчивы к этой инфекции и оставаться здоровыми даже при регулярных контактах с больным сифилисом.
2. Ваш партнер заразился сифилисом, однако это произошло менее 3 месяцев назад, и его организм еще не успел выработать антитела, указывающие на наличие заболевания.

Таким образом, если у вас подтвержден диагноз сифилиса, а у вашего партнера результаты анализов отрицательны, ему рекомендуется сдать повторные анализы через несколько месяцев, либо пройти курс профилактического лечения.

4. Через какой период времени после курса лечения можно сдавать повторные анализы на сифилис?

5. Какие результаты анализов на сифилис подтверждают полное излечение и являются поводом для снятия с учета?

Для контроля излеченности сифилиса используются нетрепонемные тесты (которые позволяют определять титр антител в крови): микрореакцию преципитации (МР) или реакцию Вассермана (РВ, RW).

Снятие с учета производится при условии получения 3 отрицательных результатов анализа, проведенных с интервалом в 3 месяца (то есть, это возможно не ранее, чем через 9 месяцев после окончания курса лечения).

6. Почему после полного курса лечения от сифилиса результаты анализов остаются положительными?

Все трепонемные тесты, как правило, остаются положительными после прохождения полного курса лечения сифилиса и выздоровления. Поэтому, эти анализы не используются для контроля излеченности сифилиса.

Если по окончании курса лечения нетрепонемные тесты (реакция Вассермана (РВ, RW) и/или микрореакция преципитации (МР)) остаются положительными, то необходимо определять количество (титр) антител в крови в течение 12 месяцев (сдавать кровь для анализа каждые 3 месяца). На основании изменений титра антител определяют дальнейшую тактику:

Если титр антител уменьшился в 4 и более раза в течение года, то наблюдение продолжают еще 6 месяцев. Если титр продолжает снижаться, то наблюдение снова продлевают на 6 месяцев. Если через 2 года после окончания курса лечения результаты анализов продолжают давать сомнительные, либо слабоположительные результаты, то говорят о серорезистентном сифилисе.

Если титр антител не снизился, либо снизился менее чем в 4 раза в течение года, то также говорят о серорезистентном сифилисе.

7. Что такое серорезистентный сифилис и как он лечится?

Серорезистентный сифилис — это состояние, при котором после окончания полного курса лечения антибиотиками, анализы на сифилис (главным образом, микрореакция преципитации (МР)) остаются положительными. Существует 2 возможные причины серорезистентности сифилиса:

1. Лечение не помогло, и возбудитель сифилиса все еще находится в организме, стимулируя выработку антител. Лечение сифилиса может оказаться неэффективным в следующих случаях: позднее выявление и начало лечения сифилиса, неправильное лечение, перерывы в курсе лечения, устойчивость бледной трепонемы к антибиотикам.
2. Лечение помогло, однако из-за нарушений в работе иммунной системы антитела против бледной трепонемы продолжают вырабатываться. Причины таких нарушений пока не известны.

При обнаружении серорезистентности, врач первым делом постарается выяснить, если бледная трепонема все еще находится в организме. Для этого врач может назначить дополнительные анализы (например, ПЦР, иммуноферментный анализ (ИФА)). Если выяснится, что первый курс лечения не помог, и в организме еще имеются возбудители сифилиса, то вам будет назначен повторный курс лечения (обычно, антибиотиками из группы пенициллинов). Если же серорезистентность вызвана нарушениями в работе иммунной системы, то дополнительное лечение антибиотиками бессмысленно (так как на самом деле, сифилис уже излечен).

размер шрифта

ПРИКАЗ Минздрава СССР от 02-09-85 1161 О СОВЕРШЕНСТВОВАНИИ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА (вместе с ИНСТРУКЦИЕЙ ПО... Актуально в 2018 году

Методика постановки РИФ - АБС

Испытуемая сыворотка крови

Кровь для получения сыворотки крови берут из локтевой вены в чистую и сухую пробирку в объеме 5 мл и обрабатывают также, как для постановки реакции Вассермана. Инактивируют сыворотки крови однократно при температуре 56° в течение 30 минут. В связи с тем, что РИФ-абс ставится нестерильно, использование стерильной посуды и соблюдение условий стерильности при хранении сывороток крови не обязательно. Оно имеет значение только для более длительного сохранения сывороток крови до исследования.

В качестве антигена используют взвесь патогенных бледных трепонем штамма Никольса из 7-суточного орхита кролика. Здоровых кроликов-самцов с отрицательными результатами реакции Вассермана и РИТ заражают интратестикулярно и при возникновении орхита извлекают из яичек бледные трепонемы так же, как в случае получения антигена для РИТ. Полученную взвесь бледных трепонем сливают с кусочков яичка в стерильные пробирки с ватными пробками и оставляют в холодильнике при 4° на сутки, после чего отделяют от осадка и при тех же условиях сохраняют весь период использования.

Получение и хранение антигена требует соблюдения условий стерильности, т.к. с одним и тем же антигеном реакция может ставиться в течение 2-4 месяцев. Для антигена следует выбирать ту взвесь, в которой не наблюдается агглютинация трепонем и имеется достаточное их количество. Антиген может быть получен в ампулах из других лабораторий. Перед каждой постановкой реакции взвесь хорошо перемешивают и исследуют в микроскопе с конденсором темного поля зрения для определения ее густоты. Для постановки РИФ-абс необходимо иметь взвесь, содержащую 40-60 трепонем в темном поле зрения, при наличии более густой взвеси ее необходимо развести.

В качестве сорбента для РИФ-абс может быть использован ультраозвученный трепонемный антиген для РСК, выпускаемый Каунасским предприятием по производству бактерийных препаратов Минздрава СССР. Он представляет собой разрушенную ультразвуком взвесь смеси культуральных бледных трепонем штаммов V, VII, VIII, IX и Рейтера. Каждая серия сорбента перед использованием в РИФ-абс с диагностической целью должна быть оттитрована.

Титрование сорбентов

Сорбенты титруют на сыворотках крови больных сифилисом, дающий в РИФ резко (4+) и слабо (2+) положительный результат в разведении 1: 5, а также на сыворотках крови лиц, свободных от сифилитической инфекции, дающих в РИФ-5 отрицательный результат и неспецифическую позитивность (2+ и более).

Пример определения титра сорбента

Цельный сорбент разводят фосфатным буфером, РН = 7,2, в 2, 3, 4 раза и более. Берут 3 сыворотки крови от больных сифилисом, одна из которых дает в РИФ-5 резкоположительный (4+) результат, 2 - слабоположительный (2+), и 5 сывороток крови от людей, свободных от сифилитической инфекции, 3 из которых дают неспецифические результаты и РИФ-5 (2+ и более). Все сыворотки крови разводят в 5 раз сорбентом, разведенным в свою очередь в 2, 3, 4 и более раз фосфатным буфером. Затем сыворотки крови исследуют в реакции. После учета результатов выбирают разведение сорбента, при котором сорбированные сыворотки крови больных сифилисом сохраняют степень позитивности, аналогичную полученной с сыворотками крови, разведенными фосфатным буфером, а сыворотки крови лиц, свободных от сифилитической инфекции, не дают свечения. Это разведение сорбента является его титром.

Титром сорбента в данном случае явилось разведение 1: 3, при котором все сыворотки крови больных сифилисом сохраняли степень позитивности, полученную в контроле, и в то же время надежно снималась неспецифическая позитивность несифилитических сывороток крови.

Антивидовая люминесцирующая сыворотка

Для исследования в РИФ-абс сывороток крови людей необходима меченная флюорохромом сыворотка крови животных, иммунизированных сывороточным белком человека. Лиофильно высушенную люминесцирующую сыворотку растворяют при соблюдении условий стерильности в дистиллированной воде в том объеме, который указан на этикетке ампул, переливают в стерильную пробирку с резиновой пробкой и в процессе использования хранят при 4° в течение 1-2 месяцев.

В день постановки реакции нужное количество этой сыворотки разводят по титру дистиллированной водой. Указанное на этикетке рабочее разведение сыворотки не годится для постановки реакции с целью серодиагностики сифилиса, поэтому титр каждой серии необходимо определять заново.

Таблица N 13

Результаты титрования сорбента

Титрование антивидовой люминесцирующей сыворотки

Берут 5 сывороток крови больных сифилисом и 5 сывороток крови здоровых людей, разводят их в 5 раз сорбентом (с учетом его титра) и ставят реакцию с использованием во II фазе различных разведений люминесцирующей сыворотки против сывороточных глобулинов человека той серии, титр которой определяется. Следует учесть, что титр люминесцирующих сывороток, выпускаемых в настоящее время ИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи, колеблется при постановке РИФ-абс от 1: 100 до 1: 140. При учете реакции предварительным титром люминесцирующей сыворотки следует считать то разведение, при использовании которого с положительными сыворотками крови получено хорошее свечение трепонем, а с отрицательными свечение антигена не получено. Большее разведение люминесцирующей сыворотки, чем титр, приводит к понижению чувствительности реакции, а меньшее - к снижению специфичности. После определения предварительного титра следует его уточнить на большем числе положительных и отрицательных сывороток крови. Окончательным титром можно считать тот, который проверен на 100 сыворотках крови, причем из них не менее 20 должно быть от больных сифилисом.

Для предотвращения пророста после разведения сухой люминесцирующей сыворотки дистиллированной водой к ней необходимо добавить мортиолат из расчета 1 объема его раствора 1: 1000 к 9 объемам люминесцирующей сыворотки. При взятии новых ампул той же серии титр следует только проверить и уточнить на 10 заведомо положительных и отрицательных сывороток крови.

Пример определения предварительного титра люминесцирующей антивидовой сыворотки

Готовят 60 препаратов, нумеруют их от 1 до 60. Берут 10 сывороток крови - 5 от больных сифилисом, 5 от здоровых людей. Все сыворотки крови разводят в 5 раз разведенным но титру сорбентом.

На пронумерованные 1-10, 11-20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60 препараты наносят в I фазе реакции одни и те же 10 сывороток крови, разведенных в 5 раз сорбентом. Во II фазе реакции на 1-10 препараты наносят люминесцирующую сыворотку, разведенную 1: 100, на 11-20 1: 110, на 21-30 - 1: 120, на 31-40 - 1: 130, на 41-50 - 1: 140, на 51-60 - 1: 150.

Техника постановки РИФ-абс

Из антигена готовят препараты на тонких, хорошо обезжиренных предметных стеклах, на обратной стороне которых стеклорезом обозначены кружки диаметром 0,7 см (по 10 кружков на 1 предметном стекле). В пределах кружка на стекло наносят антиген-взвесь бледных трепонем. Запаянным концом пастеровской пипетки круговыми движениями взвесь распределяют в пределах кружка, высушивают на воздухе и фиксируют 10 минут в химически чистом ацетоне. Затем препараты нумеруют. Инактивированные испытуемые сыворотки крови разводят в 5 раз сорбентом, разведенным по титру буферным раствором. В штатив помещают ряд пробирок, число и номер которых соответствует числу и номеру испытуемых сывороток крови. В пробирки пипеткой разливают разведенный по титру сорбент по 0,2 мл, затем добавляют по 0,05 мл цельной испытуемой сыворотки крови и хорошо перемешивают. Разведение сыворотки крови можно осуществлять аппаратом Флоринского. Разведенные сорбентом сыворотки крови наносят на антиген так, чтобы равномерно покрыть мазок, и препараты помещают во влажную камеру, которую закрывают крышкой и помещают на 30 минут в термостат при 37° (I фаза реакции). После первой фазы препараты осторожно промывают в 2 порциях фосфатного буфера, причем во вторую порцию препараты помещают на 10 минут, высушивают, после чего их вновь помещают во влажную камеру, наносят разведенную по титру люминесцирующую сыворотку и оставляют при комнатной температуре на 30 минут (II фаза реакции). По окончании второй фазы препараты промывают фосфатным буфером, как описано выше, высушивают и наносят на поверхность мазков по капле нелюминесцирующего иммерсионного масла (диметилфталата).

Исследование препаратов производят в люминесцентном микроскопе с ртутно-кварцевой лампой ДРШ-250 с иммерсионной системой, окуляром 4Х или 5X, фильтрами СЗС-7 или 14, ФС-1. БС-8 и ЖС-18 или Т-2Н. Учет реакции осуществляется путем оценки свечения бледных трепонем. Положительными в РИФ-абс считают сыворотки крови, которые дают свечение на 4+, 3+ и 2+. Блестящее зелено-желтое свечение оценивается на 4+, яркое - 3+, слабое свечение2+. Отрицательными считают сыворотки крови, которые дают свечение на 1+ (трепонемы в препарате окрашены интенсивнее фона) или не дают его.

В каждой постановке РИФ-абс необходимо использовать следующие контроли:

Резкоположительный контроль. Сыворотка крови больного сифилисом, дающая свечение на 4+ при разведении буфером в 5 раз. При разведении в 5 раз сорбентом сыворотка крови не должна терять степень позитивности более, чем на 1+.

Слабоположительный контроль. Цельная или разведенная сыворотка крови больного сифилисом, дающая слабую степень свечения антигена на 2+ при разведении буфером в 5 раз. При разведении сорбентом позитивность ее должна сохраняться.

Неспецифический контроль. Несифилитическая сыворотка крови, дающая при разведении буфером флюоресценцию не менее 2+. При разведении сорбентом позитивность ее должна быть ликвидирована.

Контроли антигена, сорбента, люминесцирующей сыворотки могут ставиться только при использовании новых серий этих ингредиентов.

Методика постановки РИФ-абс с капиллярной кровью

Постановка РИФ-абс возможна не только с сывороткой крови, но и с кровью, взятой из пальца. Эту модификацию РИФ-абс можно использовать при обследовании на сифилис детей, при трудности получения крови из вены у взрослых, при массовом обследовании различных контингентов на сифилис.

При постановке РИФ-абс с кровью применяют те же ингредиенты реакции, что и при постановке РИФ-абс с сывороткой крови (антиген, сорбент, люминесцирующая сыворотка). Титр люминесцирующей сыворотки определяют по вышеизложенной схеме, но при постановке реакции с кровью. Кровь для исследования после прокола пальца пациента набирают микропипеткой до метки 0,1 мл, быстро выдувают в пробирку, содержащую 0,3 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивают пипеткой и фильтруют через бумажный фильтр, смоченный дистиллированной водой. Постановка реакции с разведенной кровью возможна как в день взятия ее, так и через 1-2 дня при условии хранения при 4°.

Непосредственно перед постановкой реакции ко всем образцам крови, включенным в постановку реакции, добавляют по 0,1 мл цельного сорбента, перемешивают пипеткой и встряхиванием, помещают на 30 минут в термостат при 37°. Затем кровь, обработанную сорбентом, наносят на мазки антигена и помещают ее во влажную камеру при 37° (1 фаза реакции). По истечении срока экспозиции препараты промывают в первой порции фосфатного буфера так, чтобы на стеклах не осталось следов крови и помещают их на 10 минут во вторую порцию буфера. После высушивания мазков проводят II фазу реакции. При этом на препараты наносят разведенную по титру, установленному для данной модификации РИФ, люминесцирующую сыворотку против глобулинов человека. Стекла во влажной камере вновь помещают в термостат при 37°.

Через 30 минут препараты вновь промывают в 2 порциях фосфатного буфера в течение 10 минут, высушивают и монтируют для люминесцентной микроскопии. Исследование препаратов и учет результатов реакции проводят так же, как при постановке РИФ-абс с сывороткой крови.

Методика постановки РИФ-200

Методика постановки РИФ-абс и РИФ-200 близки. При постановке РИФ-200 обработка испытуемых сывороток крови, приготовление антигена, подготовка антивидовой люминесцирующей сыворотки и ее титрование производят так же, как при постановке РИФ-абс. Следует учесть только, что титры люминесцирующей сыворотки, выпускаемой в настоящее время, в РИФ-200 колеблются от 1: 20 до 1: 50.

Техника постановки РИФ-200

Испытуемые сыворотки крови разводят в 200 раз фосфатным буфером. Для этого в штатив помещают 3 ряда пробирок, число и нумерация которых в каждом ряду соответствует числу и нумерации испытуемых сывороток крови в рабочем журнале. В первом ряду налиты цельные испытуемые сыворотки крови, во втором ряду в пробирки наливают по 0,45 мл буфера, в третьем - по 0,95 мл буфера. Во втором ряду готовят разведение сывороток крови в 10 раз, для чего из каждой пробирки первого ряда отдельной 1 мл градуированной пипеткой берут 0,05 мл испытуемой сыворотки крови, переносят в соответствующую пробирку второго ряда и смешивают с имеющимся там буфером. Из каждой пробирки второго ряда той же самой пипеткой переносят по 0,05 мл разведенной уже в 10 раз испытуемой сыворотки крови в соответствующую пробирку третьего ряда и получают разведение в 200 раз.

При постановке реакции на помещенные во влажную камеру препараты наносят разведенные в 200 раз испытуемые сыворотки крови так, чтобы их номера, обозначенные на пробирках, соответствовали номерам на предметных стеклах. После нанесения на препараты сыворотки крови влажную камеру помещают на 30 минут в термостат с температурой 37° (I фаза реакции). Затем препараты промывают 10 минут в 2 порциях буфера и высушивают. После этого их вновь помещают во влажную камеру и на все наносят разведенную по титру люминесцирующую сыворотку (II фаза реакции). Вторую фазу проводят 30 минут при комнатной температуре, после чего препараты 10 минут промывают, высушивают и монтируют для люминесцентной микроскопии.

Учет результатов РИФ-200 производят так же, как и РИФ-абс.

В том случае, когда клиницистов интересует титр флюоресцирующих антител в сыворотке крови больного, РИФ-абс и РИФ-200 следует ставить с последовательным разведением испытуемых сывороток крови и титром флюоресцирующих антител считать то наибольшее разведение сыворотки крови, которое еще дает положительный результат реакции. Обозначать титр принято числом, характеризующим степень разведения испытуемой сыворотки крови, например, 5, 10, 20, 40 и т.д. (РИФ-абс) или 200, 400, 800 и т.д. (РИФ-200).

При постановке обеих модификаций реакции для разведения испытуемых сывороток крови и для промывания препаратов после I и II фаз следует использовать фотфатный буфер следующего состава: 1 л дистиллированной воды, 6,8 г натрия хлорида, 1,48 г двузамещенного фосфорно-кислого натрия, 0,43 г однозамещенного фосфорнокислого калия (РН = 7,2). Приготовленный раствор хранят при комнатной температуре не более недели.

В связи с возможностью получения отрицательных результатов при наличии флюоресцирующих антител не следует исследовать кровь и сыворотку крови в РИФ-абс и РИФ-200 во время лечения больных пенициллином.

Методика постановки РИФ-ц

Ранняя диагностика поражений нервной системы при сифилисе является актуальным вопросом в деле борьбы с этим заболеванием. В связи с тем, что РИФ-ц обладает большей чувствительностью, чем все другие используемые для ликвордиагностики сифилиса тесты, эта модификация РИФ может быть рекомендована для диагностики сифилитических поражений центральной нервной системы при всех формах сифилиса.

Для постановки РИФ-ц используют тот же антиген, люминесцирующую сыворотку, что и для постановки РИФ-абс и РИФ-200 с сывороткой крови. Аналогичны также определение флюоресцирующих антител в ликворе и сыворотке крови и учет реакции.

Спинномозговая жидкость вводится в реакцию неинактивированной и цельной. До постановки реакции ее можно сохранять в морозильном отделении холодильника в пробирках под резиновыми пробками до 2 недель. Оттаивание производят при комнатной температуре.

Техника постановки РИФ-ц

В I фазе реакции на антиген наносят 0,05 мл неразведенной испытуемой спинномозговой жидкости, препараты помещают во влажную камеру на 30 минут при комнатной температуре. Затем их промывают фосфатным буфером, РН = 7,2, в течение 10 минут, высушивают. Во II фазе на препараты наносят разведенную по титру люминесцирующую сыворотку, которую титруют при постановке реакции со спинномозговой жидкостью. Выдерживают препараты при комнатной температуре 30 минут во влажной камере, промывают, высушивают, монтируют для люминесцентной микроскопии.

Источники ошибок

1. Несоблюдение условий приготовления, хранения реагентов и постановки реакции.

2. Низкое качество люминесцирующей сыворотки и неточное определение ее титра.

3. Нанесение исследуемого материала или люминесцирующей сыворотки при постановке реакции не на препарат, а на другую сторону предметного стекла.

4. Неправильная установка освещения в люминесцентном микроскопе.

5. Низкое качество антигена.

В серологической диагностике сифилиса, очень важно получить достоверный и точный результат.

Чтобы повысить качество данных, предпринимаются определенные действия:

• Исследуемая сыворотка разводится в 200 раз (1:200), чтоб избежать ложноположительных реакций. Тогда говорят, что проводится анализ на сифилис РИФ 200 .
• В другом варианте, при разведении сыворотки 1:5, дополнительно используется специальный абсорбент, который собирает на себе «лишние» антитела, чтоб они не искажали результаты.

На руку исследователям играют и размеры трепонем. Крупные микробные тела спирохет хорошо заметны при люминесцентной микроскопии. Если на них «прицепляются» меченные люминофором белки из сыворотки. Использование стандартизированного антигена и сывороток, позволяет до максимума повысить чувствительность и специфичность РИФ в диагностике сифилиса.

Частные варианты анализов РИФ: РИФ абсорбция

Один из альтернативных способов называется РИФ-Абс. От обычной методики он отличается низким разведением исследуемой сыворотки – 1:5 против 1:200, как обычно.

В концентрированном образце содержится очень много активных белковых молекул.

Чтоб избежать и повысить чувствительность, сыворотку обрабатывают специальным абсорбентом из фрагментов сифилитических спирохет. Сорбент собирает на себе излишне активные антитела и потом уже образец обрабатывают промышленной, меченной люминофором сывороткой. Благодаря такой предварительной подготовке, отсеиваются все лишние молекулы, которые могли бы повлиять на результаты теста.

Ставят ее по таким показаниям:

• Положительная на фоне клинического благополучия и отсутствии рисков заражения в анамнезе.
• Позитивная РВ у больных, страдающих хроническими заболеваниями.
• Отрицательная РВ при появлении подозрительных в отношении сифилиса симптомов.

Первые позитивные результаты появляются уже на 15-16 день с момента инфицирования. Если реакция из положительной становится отрицательной, это сигнализирует о полном излечении от сифилиса. Вероятность ложноположительного результата составляет меньше 0,4%.

Такая ситуация может произойти при обследовании онкобольных, алкоголиков, беременных женщин и страдающих расстройствами иммунитета людей.

Определенная доля приходится и на технические ошибки, так как постановка достаточно сложная. Бывают случаи, когда необходимо отличить врожденную патологию от приобретенной. Сделать это можно, если поискать разные виды антител в крови пациента.

Антитела к сифилису класса M (IgM), появляются вскоре после заражения и по времени намного опережают IgG. Выявить их позволяет анализ на сифилис РИФ абсорбции IgM. Если результаты постановки этой реакции будут положительными, то можно говорить о недавнем заражении. Так случаи реинфекции можно отличить от рецидива или выявить заражение ребенка после родов.

По итогам такой методики анализов РИФ, также делают вывод об эффективности лечения раннего сифилиса.

При подозрении на сифилис обращайтесь к опытному венерологу.

Определяет антилипидные антитела (реагины). К сыворотке крови пациента добавляют сифилитические антигены, образующие с реагинами иммунный комплекс , способный адсорбировать и связывать комплемент. Если такой комплекс образуется, то разрушение эритроцитов (гемолиз) не происходит, и они выпадают в осадок (положительная реакция). Если в сыворотке пациента нет реагинов, то происходит гемолиз, и эритроциты в осадок не выпадают (отрицательная реакция).

RPR (Rapid Plasma Reagin)

Или реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном – это скрининговый метод диагностики сифилиса. Данная реакция в определенной степени может рассматриваться как более современная модификация реакции Вассермана. Основным показанием к проведению этого теста является первичное обследование на сифилис, медицинские осмотры , контроль эффективности лечения. Положительный результат требует проведения других, более точных тестов для подтверждения диагноза.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Один из самых перспективных методов лабораторной диагностики сифилиса. Его принцип - выявление специфического комплекса антиген-антитело, который образуется при соединении сифилитических антигенов, абсорбированных на твердом носителе, с антителами исследуемой сыворотки крови. В настоящее время наиболее распространенным является непрямой вариант ИФА, на заключительном этапе которого используются антитела к иммуноглобулинам человека, конъюгированные с пероксидазой хрена или другими ферментными маркерами. Измеряется окрашивание конечных продуктов этой реакции, которая зависит от количества связанных антител сыворотки.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

В ходе реакции иммунофлюоресценции (РИФ) определяется интенсивность свечения бледных трепонем в препарате, которая возникает только в присутствии антитрепонемных антител в сыворотке крови. Реакция проводится с сывороткой в разном разведении (в 10 и 200 раз).

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

Наиболее специфичный диагностический тест на сифилис. В сыворотке крови больных производится определение видеоспецифичных антител (иммобилизинов), которые обездвиживают бледные трепонемы в присутствии комплемента. С помощью микроскопа проводится подсчет доли утративших подвижность (иммобилизованных) бледных трепонем. Кровь методом РИБТ исследуют не ранее чем через 2 недели после окончания приема антибиотиков и других лекарственных средств.

Исследование крови методами РИБТ и РИФ выполняют для диагностики скрытого сифилиса. РИФ (10-ти кратное разведение сыворотки) позволяет поставить диагноз даже у тех пациентов, в исследованиях которых бледная трепонема не обнаруживается.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)

Соединение бледных трепонем сыворотки крови с обработанными специальными методами бараньими эритроцитами. При наличии в сыворотке крови возбудителя сифилиса происходит агглютинация (склеивание и последующее осаждение) эритроцитов. Реагенты вносят в лунки специальных пластин, о результате реакции судят по окрашиванию. Агглютинат эритроцитов имеет темно-красный цвет и форму пятна или кольца.

В сети клиник «МедЦентрСервис» Вы можете сдать кровь на сифилис любым из вышеописанных методов. Кровь на анализ нужно сдавать из вены, натощак (не менее 4 часов с последнего приема пищи). Не рекомендуется сдавать кровь после приема алкоголя, лекарственных препаратов , а также во время менструального цикла.
Если у Вас есть подозрение, что Вы могли заразиться сифилисом или Вы планируете беременность, то не откладывайте сдачу анализов, приходите в клиники «МедЦентрСервис» .

РИФ, РИБТ, РПГА

РИФ - реакция иммунофлюоресценции - трепонемный тест. Является одним из самых чувствительных анализов на сифилис. РИФ становится положительной через 10-20 дней после инфицирования, что относит ее к методам раннего выявления сифилиса.

Показания проведения РИФ:

• Постановка РИФ проводится у лиц с симптомами сифилиса, при этом отрицательными реакциями - РМП, РВ;
• в качестве дифференциальной реакции у лиц с положительными реакциями RW, микрореакции и отсутствием симптомов;
• у беременных при отсутствии клинических проявлений и сифилиса в анамнезе.

Методика проведения РИФ:

• При проведении реакции в сыворотку пациента добавляется кровь кролика, зараженная бледной трепонемой(возбудитель сифилиса) и флюоресцирующая(светящаяся) сыворотка. Исследование заключается в наблюдении свечения комплексов под люминесцентным микроскопом. Результаты реакции интерпретируются в зависимости от интенсивности свечения от 1+ до 4+, что указывает на наличие сифилиса. Отсутствие свечения - отрицательный результат РИФ обозначает, что обследуемый здоров. Ложные результаты анализа встречаются крайне редко при системных процессах , беременности и т.д.
• Реакция ставится в модификации РИФ-200 и РИФ-авс(абсорбция).
• Чувствительность реакции при первичном сифилисе составляет порядка 85%
• при третичном сифилисе - 98-100% .

Негативация РИФ происходит в течение нескольких лет после лечения сифилиса. После проведенной противосифилитической терапии необходимо наблюдение за показателями в динамике.

РИБТ - реакция иммобилизации бледных трепонем - является самым специфичным анализом крови на сифилис. РИБТ высококачественный, дорогостоящий анализ крови, выполнение которого могут позволить себе хорошо оснащенные лабораторные комплексы. РИБТ является основополагающей реакцией при скрытых формах сифилиса, нейросифилисе, висцеросифилисе. Позволяет отдифференцировать ложноположительные реакции от истинного заболевания сифилисом.

Постановка реакции основана на обездвиживании (иммобилизации) возбудителя сифилиса видоспецифичными антителами. Путем микроскопического исследования читается результат реакции: 0-20% - отрицательная, 21-30%- сомнительная, 31-50% - слабоположительная, 51-100% - положительная реакция. То есть к положительным результатам на сифилис относятся те, где РИБТ более 50%. При сифилисе РИБТ становится положительной достаточно медленно: в первичный периоде сифилиса она еще отрицательна, во вторичном свежем периоде - положительна в 50% случаев, во вторичном рецидивном периоде - положительна в 90-100%, в третичном периоде - положительна в 99-100%.

Негативация РИБТ осуществляется десятилетиями, поэтому как критерий достоверности излеченности ее использовать неправомочно, тем не менее динамическое наблюдение после проведенного противосифилитического лечения необходимо.

Проведение реакции РИБТ целесообразно не ранее чем через 30 дней после окончания лечения. РПГА - реакция пассивной гемагглютинации - относится к трепонемным тестам, проводится в комплексе с нетрепонемными. Используется для подтверждения диагноза сифилиса на любой его стадии.

Реакцию целесообразно проводить через 4 недели после предполагаемого заражения. При проведении реакции к сыворотке крови пациента добавляют препарат, приготовленный из эритроцитов животного происхождения, сенсибилизированных антигеном бледной трепонемы - возбудителя сифилиса.

Суть реакции РПГА заключается в склеивании (агглютинации) в присутствии антител к трепонеме и образовании агглютината - фигуры, которую наблюдает врач - лаборант. Реакция оценивается по количеству +: 4+- резкоположительный результат, 3+-положительный, 2+-слабоположительный, 1+-сомнительный, - - отрицательный результат. При положительном результате реакции проводится количественная оценка с определением концентрации (титра) антител. При прогрессировании сифилиса - титр антител постоянно растет.

РПГА остается положительной в течение десятилетий после лечения сифилиса, поэтому не может использоваться в качестве критерия достоверности излеченности. Однако необходимо наблюдать титр антител РПГА в динамике.

Метод обладает высокой чувствительностью . Результаты РПГА могут быть ложноположительны. К таким результатам анализа могут приводить болезни соединительной ткани , некоторые инфекции, и т.д.

Лабораторные исследования плазмы крови были и остаются главным способом диагностики и мониторинга сифилиса.

Этой болезни непостоянны, а скрытые формы вообще внешне не видны. Среди всего многообразия серологических методик, самые достоверные результаты предоставляет анализ на сифилис РИФ.

РИФ – это реакция иммунофлюоресценции. По диагностическим возможностям эта методика относится к непрямым специфическим тестам. То есть сам возбудитель обнаружить с ее помощью не выйдет. Но по косвенным признакам можно сделать обоснованное заключение о наличии или отсутствии бледной трепонемы в организме.

Для исследования требуются:

• Образец крови пациента. Как правило, используется венозная, однако имеются варианты проведения РИФ с капиллярной кровью из пальца.
• Типовой, промышленного изготовления, трепонемный антиген. Это особые белки спирохеты, которые служат «якорями» для антител к бледной трепонеме из сыворотки больного.
• Стандартная с белками-иммуноглобулинами, которые связываются с антителами крови пациента.
• Люминесцентный микроскоп.

Эта реакция обладает очень высокой специфичностью и чувствительностью. Но обходится недешево и ставится не так уж и легко. Поэтому в основном используется для верификации диагноза в сомнительных и ложноположительных случаях.

Как проводится РИФ-диагностика сифилиса?

Алгоритм постановки реакции иммунофлюоресценции состоит из нескольких шагов. В немалой степени из-за сложности проведения этой методики, она не подходит для массовых скрининговых исследований.

Сами шаги такие:

• Полученным от пациента образцом крови/плазмы, обрабатывают предметное стекло, на котором находится высушенный трепонемный антиген. Его получают из тканей яичка кролика, зараженного спирохетой штамма Никольса.
• Выдержав несколько минут, стекло промывают дистиллированной водой.
• Промытый образец обрабатывают специальной сывороткой промышленного изготовления, которая содержит в себе собственные антитела к человеческим противотрепонемным антителам. Иммуноглобулины этой сыворотки заранее помечены специальным веществом, которое под ультрафиолетом светится желто-зеленым цветом.
• Затем снова следует промывка.
• Предметное стекло помещается в люминесцентный микроскоп и изучается.

Если лаборант наблюдает в окуляре микроскопа характерное свечение, значит, антитела к бледной трепонеме в крови пациента были. Они связались с типовым антигеном. А на них, в свою очередь, прореагировали меченные люминофором иммуноглобулины из стандартизированной промышленной сыворотки.

Анализ на сифилис РИФ: достоверность результатов

В серологической диагностике сифилиса, очень важно получить достоверный и точный результат.

Чтобы повысить качество данных, предпринимаются определенные действия:

• Исследуемая сыворотка разводится в 200 раз (1:200), чтоб избежать ложноположительных реакций. Тогда говорят, что проводится анализ на сифилис РИФ 200 .
• В другом варианте, при разведении сыворотки 1:5, дополнительно используется специальный абсорбент, который собирает на себе «лишние» антитела, чтоб они не искажали результаты.

На руку исследователям играют и размеры трепонем. Крупные микробные тела спирохет хорошо заметны при люминесцентной микроскопии. Если на них «прицепляются» меченные люминофором белки из сыворотки. Использование стандартизированного антигена и сывороток, позволяет до максимума повысить чувствительность и специфичность РИФ в диагностике сифилиса.

Частные варианты анализов РИФ: РИФ абсорбция

Один из альтернативных способов называется РИФ-Абс. От обычной методики он отличается низким разведением исследуемой сыворотки – 1:5 против 1:200, как обычно.

В концентрированном образце содержится очень много активных белковых молекул.

Чтоб избежать и повысить чувствительность, сыворотку обрабатывают специальным абсорбентом из фрагментов сифилитических спирохет. Сорбент собирает на себе излишне активные антитела и потом уже образец обрабатывают промышленной, меченной люминофором сывороткой. Благодаря такой предварительной подготовке , отсеиваются все лишние молекулы, которые могли бы повлиять на результаты теста.

Ставят ее по таким показаниям:

• Положительная на фоне клинического благополучия и отсутствии рисков заражения в анамнезе.
• Позитивная РВ у больных, страдающих хроническими заболеваниями.
• Отрицательная РВ при появлении подозрительных в отношении сифилиса симптомов.

Первые позитивные результаты появляются уже на 15-16 день с момента инфицирования. Если реакция из положительной становится отрицательной, это сигнализирует о полном излечении от сифилиса. Вероятность ложноположительного результата составляет меньше 0,4%.

Такая ситуация может произойти при обследовании онкобольных, алкоголиков, беременных женщин и страдающих расстройствами иммунитета людей.

Определенная доля приходится и на технические ошибки, так как постановка достаточно сложная. Бывают случаи, когда необходимо отличить врожденную патологию от приобретенной. Сделать это можно, если поискать разные виды антител в крови пациента.

Антитела к сифилису класса M (IgM), появляются вскоре после заражения и по времени намного опережают IgG. Выявить их позволяет анализ на сифилис РИФ абсорбции IgM. Если результаты постановки этой реакции будут положительными, то можно говорить о недавнем заражении. Так случаи реинфекции можно отличить от рецидива или выявить заражение ребенка после родов.

По итогам такой методики анализов РИФ, также делают вывод об эффективности лечения раннего сифилиса.

При подозрении на сифилис обращайтесь к опытному венерологу.

Главная » Анализы » Что такое титры при сифилисе. Анализ на сифилис риф

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — серологическая реакция, позволяющая выявить антитела к известным антигенам. Метод заключается в микроскопии окрашенных мазков.

Данную реакцию используют в иммунологии, вирусологии и микробиологии. Она позволяет определить наличие вирусов, бактерий, грибов, простейших и ИКК. РИФ очень широко применяется в диагностической практике для обнаружения вирусных и бактериальных антигенов в инфекционном материале. Метод основан на способности флюорохрома вступать в связь с белками, не нарушая при этом их иммунологической специфичности. В основном применяется при диагностике инфекций мочеполовых путей.

Различают следующие методы проведения реакции иммунофлюоресценции: прямой, непрямой, с комплементом. Прямой метод заключается в окрашивании материала флюорохромами. Благодаря способности антигенов микробов или тканей светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа, они определяются как клетки с ярко окрашенной каймой зеленного цвета.

Непрямой метод заключается в определении комплекса антиген+антитело. Для этого опытный материал обрабатывается антителами антимикробной кроличьей сыворотки, предназначенной для диагностики. После того как антитела свяжутся с микробами, их отделяют от не связавшихся и обрабатывают антикроличьей сывороткой, помеченной флюорохромом. После этого комплекс микроб+анимикробные антитела+анитикроличьи антитела определяется с помощью ультрафиолетового микроскопа также, как и при прямом методе.

Реакция иммунофлюоресценции незаменима при диагностике сифилиса. Под воздействием флюорохрома возбудитель сифилиса определяется как клетка с желто-зеленой каймой. Отсутствие свечения означает, что пациент не заражен сифилисом. Этот анализ часто назначается при положительной реакции Вассермана. Данный метод очень эффективен при диагностике, так как позволяет определить возбудителя на ранних стадиях заболевания.

Кроме того, что РИФ позволяет диагностировать сифилис, его также применяют для определения наличия таких возбудителей как хламидии, микоплазма, трихомонады, а также возбудителей гонореи и генитального герпеса.

Для проведения анализа используют мазки или венозную кровь. Процедура взятия мазка совершенно безболезненная и не представляет никакой опасности. К сдаче данного анализа необходимо подготовиться. За двенадцать часов до него не рекомендуется пользоваться средствами гигиены, такими как мало или гели. Также иногда по показаниям врача проводиться провокация. Для этого рекомендуют прием острой пищи или алкоголя или проводится инъекция провоцирующего вещества, например гоновакцина или пирогенал. Помимо этого промежуток между приемом антибактериальных препаратов и сдачей анализа должен быть не менее четырнадцати дней.

При оценке результатов следует учитывать тот факт, что свечение наблюдается не только у живых бактерий, но и у мертвых, особенно это относится к хламидиям. После курса антибиотиков мертвые клетки хламидий также обладают свечением.

При правильной подготовке пациента и соблюдении техники взятия мазка, данный анализ позволяет определить заболевания на ранних стадиях, что очень важно для своевременного лечения. Положительными сторонами данного метода является короткие сроки получения результата, простота выполнения и небольшая стоимость анализа.

К недостаткам можно отнести то, что для проведения анализа необходимо достаточно большое количество исследуемого материала. Кроме того, оценку результатов может проводить только опытный специалист.